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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測花鯧中水解氨基酸

2021-02-08

摘要：

以花鯧為原料，使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸自動(dòng)分析儀對其肌肉的氨基酸組成進(jìn)行分析。結(jié)果表明花鯧肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為14443.578mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的39.59%，鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.73%。

1. 樣品前處理

2. 所用試劑

   1. 濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

   2. 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

   3. 水：去離子水

   4. 苯酚：須重蒸

   5. 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

1. 前處理設(shè)備

2. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。

3. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL

4. 勻漿機(jī)。

5. 無油真空泵

6. 干浴水解濃縮儀

7. 移液管

8. 0.22um濾膜

    

9. 樣品制備（參考國標(biāo)GB 5009.124-2016）

   原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內(nèi)臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機(jī)中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保存，分析時(shí)取出解凍后使用。

    

10. 試樣水解

    稱取含蛋白7.5-25mg的試樣，加入水解管中，加入15mL 6mol/L鹽酸，繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中，110°C水解22-24h，冷卻、混勻、開管、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取適量樣液，在干浴水解濃縮儀中50°C吹干，必要時(shí)加入少許水，重復(fù)吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。

     

11. 分析方法描述（Biochrom 30+）

    氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

12. 色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6´20cm

13. 分離程序：

1. 運(yùn)行時(shí)間：經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 57min

2. 反應(yīng)單元溫度：135°C。

3. 檢測波長：570nm、440nm同時(shí)檢測。

    

    

4. 樣品中氨基酸含量的計(jì)算

      樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計(jì)算:

   ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

   式中:

   ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

   Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

   As ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

   cs ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

    

   試樣中各氨基酸的含量按式(3)計(jì)算:

   Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………(3)

   式中:

   Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

   ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

   F ———稀釋倍數(shù);

   V ———試樣水解液轉(zhuǎn)移定容的體積,單位為毫升(mL);

   M ———氨基酸i的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol);

   m ———稱樣量,單位為克(g);

   10⁹ ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數(shù);

   100 ———換算系數(shù)。

    

    

    

    

    

附、花鯧分析圖譜及做樣結(jié)果